OD值在ELISA中的作用

OD值（光密度值）是ELISA檢測中通過酶標(biāo)儀測定的吸光度指標(biāo)，直接反映樣本中目標(biāo)物質(zhì)的含量。其核心作用包括：

?定量分析基礎(chǔ)?：OD值與目標(biāo)物濃度呈正相關(guān)，濃度越高，OD值越大。

?結(jié)果判讀依據(jù)?：通過對比樣品OD值與臨界值（如S/CO值）判斷陰陽性。

?標(biāo)準(zhǔn)曲線計算?：標(biāo)準(zhǔn)曲線將OD值轉(zhuǎn)換為具體濃度，需通過四參數(shù)邏輯斯蒂等模型擬合。

影響ELISA OD值的常見因素

?樣本處理?

樣本收集、保存不當(dāng)（如反復(fù)凍融）可能影響待測物穩(wěn)定性。

溶血、脂濁、類風(fēng)濕因子等干擾物質(zhì)會導(dǎo)致假陽性或假陰性。

?試劑質(zhì)量?

抗體特異性、親和力不足會降低靈敏度或?qū)е录訇栃浴?/p>

酶底物系統(tǒng)配制錯誤或保存不當(dāng)會顯色異常?。

?操作技術(shù)?

?加樣準(zhǔn)確性?：未校準(zhǔn)的移液器或加樣速度不一致導(dǎo)致孔間體積差異?。

?洗滌技術(shù)?：洗滌不導(dǎo)致背景偏高，或過度洗滌破壞抗原-抗體結(jié)合?。

?孵育條件?：溫度波動、時間不足或未使用封板膜影響反應(yīng)效率?。

?儀器與環(huán)境?

酶標(biāo)儀未校準(zhǔn)或波長錯誤（如未使用450nm）導(dǎo)致讀數(shù)偏差?。

陽光直射、溫度波動等環(huán)境因素干擾顯色反應(yīng)?。

?標(biāo)準(zhǔn)曲線優(yōu)化?

標(biāo)準(zhǔn)品溶解不充分、稀釋未混勻或加樣不精確導(dǎo)致曲線擬合度差（R2<0.99）?。

優(yōu)化OD值讀數(shù)的關(guān)鍵措施

?嚴(yán)格操作規(guī)范?

加樣時保持垂直，避免氣泡，定期校準(zhǔn)移液器?。

洗滌4-5次，每孔250μL，拍干而非過度拍打?。

?質(zhì)量控制?

使用空白孔和陰性對照監(jiān)控背景信號?。

分批操作減少操作時差，避免顯色時間不足或過長?。

?樣本與試劑優(yōu)化?

避免溶血樣本，必要時測定血紅蛋白含量（≤5g/L）。

選擇高靈敏度試劑盒，確保抗體稀釋正確?。